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3,4-二羟基苯甲醛报告

规格:99%
包装:1kg
最小购量:1kg
CAS:139-85-5
分子式: C7H6O3
分子量:138.12

原儿茶醛报告

HPLC法测定胎羊血浆中原儿茶醛的浓度

丹参为唇形科鼠尾草属植物丹参(Salvia miltior. rhiza Bge.)的干燥根及根茎。丹参具有祛瘀止痛,活 血通经,清心除烦的功效。在妇产科方面,丹参制剂 常被用于治疗妊娠高血压综合征、妊娠肝内胆汁淤积 症、胎儿窘迫等疾病¨ 。但对于丹参制剂是否会经 母体进入胎儿体内尚不明确。本研究通过测定胎羊血 浆中丹参的有效成分原儿茶醛 ,考察丹参是否能通 过母羊进入胎羊体内,对研究丹参制剂在妊娠期应用 是否安全具有重要的意义。
1材料

1.1仪器、药品和试剂HPI100高效液相色谱仪; 丹参粉针剂,哈尔滨中药二厂,批号:060904,实验时 用生理盐水溶解;原儿茶醛(批号:0810—200004)、卡 马西平对照品(批号:0412—9503),中国药品生物物 制品检定所;水为超纯水,甲醇为色谱纯,其他试剂 均为分析纯。

1.2动物健康绵羊(湖羊)8头,羊龄2~3岁,体重 40~50 kg,由苏州大学医学院实验动物中心提供,实 验动物生产许可证号:XCYK(苏)2002—2008。

2方法与结果

2.1孕羊的外科手术及标本采集健康绵羊8头, 于妊娠116~125 d行母羊及宫腔内胎羊外科手术。术前24 h母羊禁食、禁水。术前和术中用氯胺酮和 异氟烷联合麻醉。母羊仰卧位固定,于下腹近腹中线 分层进腹,探查子宫,了解胎方位,固定胎羊后肢后 切开子宫壁,拉出后肢,于胎羊腹股沟中点偏内侧处 分别分离股动脉、股静脉,远端结扎,近端插入动静 脉导管,固定后回纳胎羊于宫腔内。缝合子宫壁后并 固定导管,缝合母羊腹壁,各种插管引至母羊背侧部 固定。术中母羊颈静脉插管补液,预防感染。术后 24 h母羊可恢复正常饮食饮水。用灭菌肝素盐水疏通 导管,分别给母羊静注庆大霉素72 mg,青霉素1 g 和胎羊静注庆大霉素8 mg,青霉素33 mg,每日1 次。手术恢复4—5 d后,通过母羊股静脉分别给予 不同剂量丹参粉针,于给药不同时间点分别采集胎羊 动脉血,取血分离血浆,于一20℃保存备用。

2.2色谱条件 色谱柱:Hypersil ODS柱(250× 4.6 mm,5 Ixm);流动相由甲醇(A)和0.2 tool-L 的 醋酸铵溶液(硫酸调pH至2.8)(B)组成,进行梯度洗 脱,在0—4 rain,B体积分数为70%,4~12 rain,B 体积分数由70%线性改变至10%,再返回起始流动 相;检测波长:280 nm;流速:1.0 mL·min ;柱 温:35℃ 。

2.3供试品溶液的制备 取血浆样品250 IxL,加 1 mol·L 盐酸100 L,酸化,加内标溶液20 L,无水乙醚2 mL涡旋7昆和提取2 min,离心(4000 r· min )10min。分取有机层,40cc水浴上通氮气挥干。 临用前残渣用100 IzL流动相溶解,进样20 L。

2.4标准曲线的制备

2.4.1标准工作液精密称取原儿茶醛对照品适量, 加1% 醋酸配成浓度为0.2 mg·mL 的贮备液 , 4℃保存。临用前,取原儿茶醛贮备液适量,用1% 醋酸溶液按倍数稀释法稀释至所需浓度。

2.4.2内标溶液精密称取卡马西平适量,用甲醇定 量稀释配成25 Ixg·mL 的内标溶液。

2.4.3标准曲线的制备精密吸取不同浓度的原儿茶醛标准工作液5O L,加入空白血浆200 IxL,从“加 1 mol·L 盐酸100 IxL”起,按“供试品溶液的制 备”方法处理。以原儿茶醛与内标的峰面积比对原儿 茶醛的浓度进行线性回归,即得标准曲线。

2.5样品测定方法精密吸取供试品溶液20 L注入 高效液相色谱仪,记录原儿茶醛与内标的峰面积,以原儿茶醛与内标的峰面积比为定量指标,根据标准曲 线计算相应的血药浓度。

2.6分析方法的评价

2.6.1特异性在本实验条件下,原儿茶醛有良好的 分离度,羊血清中杂质峰不干扰样品峰和内标峰的测 定。原儿茶醛和内标的保留时间分别是4.8 rain和 12.6 min,结果见图1。

2.6.2精密度取空白血浆200 L,加入不同浓度 的原儿茶醛标准工作液50 L,制成高、中、低3种 不同浓度样品,按“供试品溶液的制备”方法处理, “样品测定方法”测定,考察原儿茶醛的日内、日间 精密度,结果见表1。

2.6.3线性关系 取空白血浆250 IxL数份,分别加 入不同浓度原儿茶醛标准品,配制成浓度为0.02~ 12.5 g·mL 的标准品系列溶液,按“标准曲线的 制备”方法处理。记录原儿茶醛峰面积和内标峰面 积, 以样品峰面积与内标峰面积之比(Y)对原儿茶醛浓度(x)作线性回归,得回归方程:Y=一0.0289+ 0.158X,r=0.999,说明在0.02~12.5 Ixg·mL 范 围内原儿茶醛与内标的峰面积比(A样品/A内标)与其血 浆浓度线性关系良好,其最低定量限为20 ng·mL一1 o

2.6.4回收率按“精密度”方法,计算测得量,用 测得量与加入量计算回收率,结果见表2。

2.7胎羊血浆药物浓度的测定及结果将备用的血浆 37。(=溶解后,按“样品测定方法”测定,母羊静注 200,400,800 mg丹参粉针剂后胎羊血浆中原儿茶醛的浓度结果见表3,相应的平均药一时曲线见图 2。结果表明,于0.083,0.5,1.5 h,3个剂量组均 测得胎羊血浆中含有原儿茶醛,且随着给药剂量的增 加,血药浓度呈上升的趋势,具有一定的相关性。原 儿茶醛在胎羊体内很快吸收,达峰时间0.083 h,而 后以较快速度消除。2 h后,未测到原儿茶醛。

由于中药制剂成分复杂,被测成分含量较低, 而胎羊体内浓度更低,给研究带来一定难度。本文 以原儿茶醛为检测指标, 以卡马西平为内标,用 HPLC法测定胎羊血浆中的原儿茶醛浓度,方法简 便可行。丹参制剂在妊娠期的研究已有很多,但多 限于机理探讨和临床应用 。本研究通过测定胎 羊血浆中原儿茶醛的浓度,明确了丹参制剂中原儿 茶醛可以通过胎盘屏障进入胎羊体内的,而且给药 剂量与胎羊的血药浓度具有一定相关性,但是否对 胎儿造成影响,尚需对丹参制剂的安全性作进一步研究。

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